原生质体,本质上是没有细胞壁的植物细胞,是通过酶促或机械手段获得的。 这些独特的细胞具有全能性,能够作为探索植物细胞结构、化学和功能的实验系统,因此在植物科学中至关重要。
传统的原生质体活力评估方法是通过培养它们,直到发育成完整的植物来评估的,这种方法比较耗时,无法立即得到结果。 LUNA-FX7™ 自动细胞计数仪通过使用不同颜色的荧光染料进行双重染色来实现快速活力测定,从而极大地缩短了这一过程。
分离过程包括准备幼苗、切碎、消化以及清洗、离心和重悬等各个阶段。 对于荧光染色,制备、上样原生质体细胞以及绿色和红色荧光染料的混合物,并使用 LUNA-FX7™进行分析。
一项专注于确定最佳染料组合的研究得出结论,FDA/PI 或 FDA/EthD-1 对于原生质体活力评估最有效。 虽然这些染料可以有效地对原生质体细胞核进行染色,但为了检测足够的信号,必须调整红色荧光暴露水平。
有趣的是,绿色荧光染料(如 AO 和 Calcein AM)的性能因所使用的缓冲液而异。 这种变化归因于渗透压和 pH 值的差异,这显着影响细胞和染料的性能。
该研究强调 FDA/PI 或 FDA/EthD-1 染料对原生质体染色最有效。 它强调了染色后立即进行细胞计数以尽量减少背景噪音的重要性。 研究结果还反映了染料性能因细胞类型和缓冲液而异,强调需要仔细选择染料和方案,以便使用 LUNA-FX7™ 进行准确的活力评估。
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